GC-MS法同时测定榆树叶中的水杨酸和水杨酸甲酯

水杨酸、茉莉酸、水杨酸甲酯和茉莉酸甲酯是重要的植物激素和防御信号化合物,因此快速准确地测定它们的含量非常重要。本研究以不同阶段被赤叶椴树佐佐木侵染的榆叶为材料;用80%甲醇和乙酸乙酯萃取,用伯仲胺(PSA)和石墨化炭黑(GCB)纯化后,GC-MS测定信号化合物水杨酸、茉莉酸、水杨酸甲酯和茉莉酸甲酯的含量。结果表明, 短尾栀子感染后水杨酸、茉莉酸、水杨酸甲酯和茉莉酸甲酯的含量显着升高。T. akinire Sasaki,但这四种化合物的最大值出现在不同的时间。早期水杨酸含量最高,中期茉莉酸含量最高;相比之下,水杨酸甲酯和茉莉酸甲酯的含量变化则完全相反。


在自然界中遭受食草动物攻击时,除了依靠茎叶毛、刺等第一道物理屏障外,植物还依赖于激素水平的变化或某些信号物质的释放,参与化学诱导的防御攻击。1 ]。迄今为止,研究表明水杨酸、茉莉酸等植物激素及其甲基化产物在植物防御信号的传递中具有非常重要的作用[ 2]。水杨酸在植物中发挥着多种生理作用,许多实验证明它是系统获得性抗性产生的关键信号分子之一。茉莉酸广泛存在于高等植物中,是一种新型植物激素,可使植物产生多种形态或生理效应。其作用是诱导糯花的开放和块茎的形成[ 3 ],抑制花粉萌发、根系生长等[ 4 ]。此外,当植物受到病原体或食草动物的攻击时,茉莉酸可以通过改变内源水平来诱导植物启动防御系统[ 5]。作为内源性信号分子,其生理效应在植物中极为复杂,因此建立一种稳定、灵敏的内源性信号化合物测定方法具有重要意义。

植物中水杨酸和茉莉酸的含量很低,测定起来很困难。随着分离鉴定技术的发展,我们的前人已将多种方法应用于植物中信号化合物的测定。目前,测定水杨酸和茉莉酸的主要方法有ELISA、HPLC和UPLC[ 6 ]。采用ELISA的方法,样品中的水杨酸和茉莉酸得到较好的富集,然后进行色谱分析。这样,样品的回收率更高。但单克隆抗体生产难度大,不易推广。此外,结合三重四极杆质谱仪 [ 7 – 10]、飞行时间质谱仪和荧光检测器 [ 11 , 12 ],HPLC 可以同时测量茉莉酸和水杨酸的含量。张等人。用毛细管电泳激光诱导荧光检测法测定了巴西橡胶树皮提取物中茉莉酸的含量[ 13 ]。但该方法需要对不含荧光发射基团的茉莉酸进行荧光衍生化处理,分析过程较为繁琐。GC-MS 用于化合物分析的优点是经过简单分离后无需推导即可直接测量。

据我们所知,尚未报道榆树叶的信号化合物水平的测量。本文建立了提取、纯化和GC-MS测定的方法。此外,测定了四叶草 Sasaki对短尾枫叶攻击后不同时期信号化合物的含量,并分析了它们的变化。本研究的目的是揭示在瘿形成过程中寄主U. pumila叶片内源茉莉酸和水杨酸水平的变化趋势。

实验
茉莉酸、水杨酸、水杨酸甲酯、茉莉酸甲酯、二氢茉莉酸(内标,IS)、伯仲胺、石墨化炭黑购自德国sigma公司,纯度高于98.5%。

在不同的感染阶段,包括瘿形成阶段(早期)、生长(中期)和开裂(晚期)的U. pumila叶子收集自中国河北省张家口市农村。同时,还采集了同一株、同一时期的健康叶片作为对照样品。所有样品在采集后立即放入液氮中,然后储存在-80°C冰箱中。

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